| 内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建 |
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| 引用本文： | 吴萍,张文广,李金泉,李赛明,杨秀娟,徐磊,常子丽,刘兴亮,丽春,刘维,张燕军,王志新,张永斌.内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建[J].中国畜牧兽医,2010,37(8):73-77. |
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| 作者姓名： | 吴萍 张文广 李金泉 李赛明 杨秀娟 徐磊 常子丽 刘兴亮 丽春 刘维 张燕军 王志新 张永斌 |
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| 作者单位： | (1.内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室，呼和浩特 010018； 2.内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特 010018； 3.安徽省农业委员会，合肥 230001； 4.内蒙古白绒山羊种羊场，鄂尔多斯 017000） |
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| 摘 要： | 根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列，设计特异性引物，提取皮肤组织总RNA，经反转录RT-PCR扩增，产物回收纯化后与pGM-T载体连接，转化大肠杆菌感受态细胞Top10，质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定，获得阳性Hairless、β-actin重组质粒；将阳性重组质粒按103～107拷贝/反应梯度稀释作为模板，进行实时荧光定量PCR，系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示，产物熔解曲线峰值单一，说明引物特异性高，且无引物二聚体；Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r2=0.998、r2=0.999，说明线性关系好。重复性试验结果显示，所构建的重组质粒9次同条件扩增Ct值具有良好的重现性，且变异率小于6%(107拷贝/反应除外)，说明标准曲线重复性好。试验成功构建了目的基因Hairless、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线，为实时荧光定量PCR检测绒山羊Hairless基因的mRNA表达水平奠定基础。
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| 关 键 词： | 绒山羊 Hairless基因 Real-time PCR 重组质粒 标准曲线 |
Construction of Standard Plasmid and Standard Curve of Real-time PCR for Inner Mongolia Cashmere Goats Hairless Gene |
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| WU Ping,ZHANG Wen-guang,LI Jin-quan,LI Sai-ming,YANG Xiu-juan,XU Lei,CHANG Zi-li,LIU Xing-liang,LI Chun,LIU Wei,ZHANG Yan-jun,WANG Zhi-xin,ZHANG Yong-bin.Construction of Standard Plasmid and Standard Curve of Real-time PCR for Inner Mongolia Cashmere Goats Hairless Gene[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2010,37(8):73-77. |
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| Authors: | WU Ping ZHANG Wen-guang LI Jin-quan LI Sai-ming YANG Xiu-juan XU Lei CHANG Zi-li LIU Xing-liang LI Chun LIU Wei ZHANG Yan-jun WANG Zhi-xin ZHANG Yong-bin |
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| Institution: | （1.Key Laboratory of Animal Genetics,Breeding and Reproduction in Inner Mongolia Autonomous Region,Hohhot 010018,China; 2.College of Animal Science and Veterinary Medicine of Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot 010018,China; 3.Anhui Agricultural Commission,Hefei 230001,China;4.Inner Mongolia Cashmere Goat Breeding Farm，Ordos 017000，China)） |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cashmere goats Hairless real-time PCR recombinant plasmid standard curve |
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