| CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎 |
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| 引用本文： | 张晨俭,李隐侠,丁强,刘伟佳,王慧利,何南,吴家顺,曹少先.CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎[J].畜牧兽医学报,2024(1):129-141. |
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| 作者姓名： | 张晨俭 李隐侠 丁强 刘伟佳 王慧利 何南 吴家顺 曹少先 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学动物科技学院;2. 江苏省农业科学院畜牧研究所,江苏省畜禽精准育种工程研究中心,农业农村部种养结合重点实验室;3. 山东农业大学动物科技学院 |
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| 基金项目： | 江苏省重点研发计划项目(BE2019373)； |
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| 摘 要： | 旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体，体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率；在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组，2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物，对照组注射超纯水，以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板，PCR扩增靶区域并测序鉴定，发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式；根据在线网站预测，每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。结果表明，在SOCS2基因83和96号氨基酸密码子附近区域获得2条sgRNA并成功构建表达载体，体外转录获得高质量sgRNA和Cas9 mRNA;两条sgRNA均可引导Cas9蛋白在体外完全切割靶DNA;SOCS2-sg-83对胚胎的编辑效率为94.1%,160个T-A克隆中有152个在靶位点出现插入、缺失或替换，概率为95.0%,其中81.3%发生了移码突...
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| 关 键 词： | 山羊胚胎 细胞因子信号传导抑制因子2 CRISPR/Cas9 基因编辑 |
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