帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus, PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列，设计扩增引物和TaqMan探针，建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法，对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估；以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性；利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示，建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性，可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^-1。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致；对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致；建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性，可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定，具有良好的应用价值。