| 一种根癌农杆菌介导的GFP亚细胞定位方法的优化 |
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| 引用本文： | 曾洁,黄凤智,李本昌,刘梦昕,黄萱.一种根癌农杆菌介导的GFP亚细胞定位方法的优化[J].广西农业生物科学,2014(1):159-162. |
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| 作者姓名： | 曾洁 黄凤智 李本昌 刘梦昕 黄萱 |
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| 作者单位： | 西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室,陕西省生物技术重点实验室,西北大学生命科学学院,西安710069 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31300223）; 陕西省自然科学基金（2012JQ3003）; 高等学校博士学科点专项科研基金（20126101120019）; 教育部留学回国人员科研启动基金资助项目（教外司留[2013]693号）; 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室（西北大学）开放基金; 陕西省生物技术省重点实验室开发基金（12JS106）共同资助
致谢 感谢西北大学生命科学学院徐子勤教授提供AZI1：：GFP融合蛋白基因,同时对本研究给予大力支持的西北大学生命科学学院崔继红博士表示衷心感谢. |
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| 摘 要： | 利用根癌农杆菌介导的方法,采用CaMV 35S强启动子启动的含有GFP报告基因的双元表达载体pCAMBIA1301-35S-GFP-AZI1转化烟草表皮细胞。在激光共聚焦显微镜下进行观察,有绿色荧光产生。本文优化了GFP亚细胞定位的方法,即烟草为本氏烟草2～3周龄叶片,菌液OD600值为0.8,共培养时间为32 h,在此条件下能很好地进行GFP的亚细胞定位,为进一步研究新基因的亚细胞定位和瞬时表达奠定了基础。
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| 关 键 词： | 烟草 根癌农杆菌 GFP亚细胞定位 方法优化 |
An Optimized Method ofAgrobacterium tumefaciens-mediated GFP Subcelluar Localization |
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| Zeng Jie,Huang Fengzhi,Li Benchang,Liu Mengxin,Huang Xuan.An Optimized Method ofAgrobacterium tumefaciens-mediated GFP Subcelluar Localization[J].Journal of Guangxi Agricultural and Biological Science,2014(1):159-162. |
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| Authors: | Zeng Jie Huang Fengzhi Li Benchang Liu Mengxin Huang Xuan |
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| Institution: | ( Provincial Key Laboratory of Biotechnology of Shaanxi, Key Laboratory of Resource Biology and Biotechnology in Western China, Ministry of Education, College of Life Science, Northwest University, Xi＇an, 710069) |
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| Abstract: | By using the Agrobacterium tumefaciens-mediated method, the binary expression vector, pCAMBI- A1301-35S-AZI1-GFP was used to study the subcellular location, the vector with GFP report gene that is strongly activated by the strong CaMV 35S promoter to transform tobacco lower epidermal surface of tobacco leaves. The green fluorescence of GFP was observed by using laser confocal microscope. In this paper, the method of GFP subcelluar location was optimized, such as 2-3 week-old leaves of Bens tobacco, bacterium solution OD600=0.8, 32 h dark incubation. The appropriate result ofGFP subcelluar location can be obtained under the above conditions. The technologies would be widely employed to location of a new gene and expression in further research. |
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| Keywords: | Tobacco Agrobcu：terium tumefaciens Subcelluar location of GFP Optimized method |
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