| 鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较 |
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| 引用本文： | 何静怡,舒鼎铭,林楚晓,李 莹,王 艳,罗成龙.鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较[J].广东农业科学,2020,47(10):126-131. |
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| 作者姓名： | 何静怡 舒鼎铭 林楚晓 李 莹 王 艳 罗成龙 |
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| 作者单位： | 广东省农业科学院动物科学研究所 / 畜禽育种国家重点实验室 / 农业农村部家禽遗传育种重点实验室 /广东省动物育种与营养公共实验室 / 广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东 广州 510640 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31402067）；广东省自然科学基金（2018B030311044）；国家现代农业（肉鸡）产业技术体系专项（CARS-41）；“广东特支计划”科技创新青年拔尖人才项目（2015TQ01N843）；广东省农业科学院科技创新战略专项资金（高水平农科院建设）- 人才项目（R2017PY-QY007） |
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| 摘 要： | 【目的】比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法（细胞爬片法和细胞滴片法），以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法。【方法】以鸡胚为试验素材，分离原代细胞，定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞，并利用新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）lasota 株激活细胞。监测内源性蛋白 ROBO2（Roundabout）和外源性蛋白 NDV 表达情况，鸡源 NDV 抗体与小鼠源 ROBO2 单克隆抗体混合孵育，结合荧光素二抗进行标记。应用激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy, LSCM）对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据，多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法。【结果】细胞滴片制作过程繁琐且耗时长；细胞爬片则操作简单可缩短实验时间。两种制片方法的 NDV 和 ROBO2 单阳性和阴性分别存在极显著差异，双阳性存在荧光反应性显著差异。【结论】滴片法蛋白免疫反应性更优，适合标记目的蛋白进行亚细胞定位。爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性，利于两抗体荧光重叠，综合显色性更强。
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| 关 键 词： | 鸡 树突状细胞 免疫荧光 激光共聚焦扫描 细胞爬片法 细胞滴片法 |
Comparison of Slide-preparing Methods of Chicken Bone Marrow Dendritic Cells by Indirect Immunofluorescence |
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| HE Jingyi,SHU Dingmimg,LIN Chuxiao,LI Ying,WANG Yan,LUO Chenglong.Comparison of Slide-preparing Methods of Chicken Bone Marrow Dendritic Cells by Indirect Immunofluorescence[J].Guangdong Agricultural Sciences,2020,47(10):126-131. |
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| Authors: | HE Jingyi SHU Dingmimg LIN Chuxiao LI Ying WANG Yan LUO Chenglong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | chicken dendritic cell immunofluorescence laser scanning confocal microscopy cell climbing cell dropping |
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