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鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用
引用本文:彭程,刘朔,张琳,李金平,于晓慧,侯广宇,王静静,李阳,蒋文明,刘华雷. 鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用[J]. 中国动物检疫, 2021, 38(1): 100-105
作者姓名:彭程  刘朔  张琳  李金平  于晓慧  侯广宇  王静静  李阳  蒋文明  刘华雷
基金项目:国家重点研发计划项目(2017YFC1200503)
摘    要:为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。

关 键 词:H5亚型禽流感病毒;分支;双重实时荧光RT-PCR;敏感性;特异性

Establishment and Application of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for Identifying Two Branches of H5 Subtype Avian Influenza Virus
Peng Cheng,Liu Shuo,Zhang Lin,Li Jinping,Yu Xiaohui,Hou Guangyu,Wang Jingjing,Li Yang,Jiang Wenming,Liu Hualei. Establishment and Application of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for Identifying Two Branches of H5 Subtype Avian Influenza Virus[J]. China Animal Health Inspection, 2021, 38(1): 100-105
Authors:Peng Cheng  Liu Shuo  Zhang Lin  Li Jinping  Yu Xiaohui  Hou Guangyu  Wang Jingjing  Li Yang  Jiang Wenming  Liu Hualei
Abstract:
Keywords:
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