| 堆型艾美球虫侵入相关蛋白MIC3受体分子VAPB的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 周舟扬,黄剑梅,徐立新,严若峰,宋小凯,李祥瑞.堆型艾美球虫侵入相关蛋白MIC3受体分子VAPB的克隆与表达[J].畜牧与兽医,2019(8):73-78. |
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| 作者姓名： | 周舟扬 黄剑梅 徐立新 严若峰 宋小凯 李祥瑞 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院动物健康与食品安全MOE联合国际研究实验室 |
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| 摘 要： | 堆型艾美球虫感染具有寄生部位特异性,其寄生区位于鸡十二指肠,但造成这种特异性的机制尚不清楚。为研究在球虫侵入过程中可能起重要作用的配体-受体分子,对堆型艾美球虫侵入相关蛋白微线蛋白3(MIC3)的受体分子VAPB进行克隆及表达。从鸡十二指肠中分离获得肠道上皮细胞,提取细胞RNA,利用RT-PCR技术扩增VAPB基因。分析VAPB基因的分子特征,构建重组表达质粒pET-32a-VAPB,利用大肠杆菌对其进行表达、纯化,并制备大鼠抗重组VAPB蛋白多抗。序列分析揭示了VAPB具有一个完整的开放性阅读框,含有732个碱基对,编码244个氨基酸组成的分子量约为26.8 kD的蛋白,其重组蛋白rVAPB分子量约为45 kD。序列分析表明其等电点约为7.30,无信号肽,含跨膜区、多个O-糖基化位点和磷酸化位点;进化树分析表明鸡的VAPB氨基酸序列与一些动物如Numida meleagris和Coturnix japonica等亲缘关系较近。原核表达、纯化重组蛋白VAPB并获得抗rVAPB大鼠血清。Western blot分析表明鸡十二指肠上皮细胞中的天然VAPB蛋白可被抗rVAPB大鼠血清识别。结果表明:成功制备了重组蛋白VAPB及抗rVAPB大鼠血清,为研究VAPB蛋白在堆型艾美球虫侵入过程的作用提供基础。
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| 关 键 词： | 堆型艾美球虫 微线蛋白3 受体 VAPB |
Cloning and expression of Eimeria acervulina invasive related protein MIC3 receptor protein VAPB |
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