| 山羊IL-9基因克隆表达与单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 黄鑫,李庆江,徐立新,宋小凯,李祥瑞,严若峰.山羊IL-9基因克隆表达与单克隆抗体的制备[J].畜牧与兽医,2019(6):69-75. |
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| 作者姓名： | 黄鑫 李庆江 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院;安徽省五河县动物卫生监督所 |
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| 摘 要： | 为了研究捻转血矛线虫诱导山羊产生Th9型免疫应答的特点,制备了抗山羊IL-9单克隆抗体。采用基因克隆、表达和纯化得到重组蛋白IL-9,并以重组IL-9为免疫原,重组蛋白IL-9和His-tag为筛选抗原,通过杂交瘤细胞技术,筛出1株稳定分泌抗山羊IL-9单克隆抗体细胞株,命名为6A11A8。将该细胞株接种小鼠腹腔,制备腹水,并将纯化后的抗体与生物素耦合,用流式细胞术检测山羊外周血单核细胞(PBMCs)中表达IL-9的细胞亚类。结果显示:融合蛋白大小约为16 ku,主要分布于包涵体中,筛选出的6A11A8细胞株产生的抗体效价高、特异性强,其细胞上清抗体效价可达1∶2430,其抗体亚型为IgG2bκ,层析柱纯化小鼠腹水后其效价可达1∶512 000,该单抗可识别山羊PBMCs中分泌IL-9的亚类细胞。结论:本研究获得了山羊IL-9单克隆抗体,为研究山羊Th9型免疫反应奠定了基础。
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| 关 键 词： | 山羊 IL-9 原核表达 单克隆抗体 |
Cloning,expression and monoclonal-antibody preparation of goat IL-9 |
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