| 敖汉细毛羊Notch1基因真核表达载体的构建及在成纤维细胞中表达量的研究 |
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| 引用本文： | 赵然然,张梦瑶,刘开东,王国义,刘积凤,柳楠,贺建宁. 敖汉细毛羊Notch1基因真核表达载体的构建及在成纤维细胞中表达量的研究[J]. 畜牧与兽医, 2019, 0(3): 1-6 |
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| 作者姓名： | 赵然然 张梦瑶 刘开东 王国义 刘积凤 柳楠 贺建宁 |
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| 作者单位： | 青岛农业大学动物科技学院;青岛畜牧兽医研究所;赤峰市敖汉旗种羊场 |
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| 摘 要： | 本研究旨在构建敖汉细毛羊Notch1基因表达载体及转染成纤维细胞后基因表达量变化。试验以敖汉细毛羊40日龄胎儿为研究对象,提取RNA反转录并参照Gen Bank中Notch1基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Notch1基因片段,将得到的Notch1基因片段连接至pGM-T载体,构建pGM-T-Notch1克隆载体并转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定后构建pcDNA3.1-Notch1重组表达载体,转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞。将敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3.1-Notch1瞬时转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术检测Notch1基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示:经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Notch1构建成功,并且转染成纤维细胞后Notch1基因的表达量升高,且转染组的表达量极显著地高于对照组(P0.01)。结论:成功构建了敖汉细毛羊Notch1基因的表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因表达量明显升高,结果可为进一步研究其功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 成纤维细胞 表达载体构建 Notch1转染 RT-PCR 基因表达 |
Construction of Notch1 plasmid in Aohan Fine Wool Sheep and expression of the gene in fibroblasts |
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