| 副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 万莹,凌娇,王权,孙卫东,蒋蔚.副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].畜牧与兽医,2019(1):60-66. |
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| 作者姓名： | 万莹 凌娇 王权 孙卫东 蒋蔚 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所 |
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| 基金项目： | 上海市科学技术委员会科研计划项目(17140900400);国家重点研发计划项目(2017YFC1200201) |
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| 摘 要： | 为建立快捷、准确、高效检测副溶血弧菌的方法,以副溶血弧菌种属特异性基因toxR和毒力因子tdh、trh基因序列,分别设计3对特异性引物及相应TaqMan探针,并在toxR、tdh和trh基因的3个探针的5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3'端标记BHQ1淬灭荧光基团,通过优化反应体系和反应参数,确定最佳反应体系,建立一种基于Taq Man探针定量检测副溶血弧菌的三重荧光定量PCR方法。结果:本试验所建立三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限达到了10 CFU/m L,重复性试验中每组变异系数均小于1%;检测人工染菌的虾肉和贝类样品时,最低检出限亦达到10 CFU/m L,且整个检测扩增时间大约为1 h。结果表明,本研究建立的三重荧光PCR检测方法,特异性强、敏感性高、重复性好且耗时短,是高通量检测致病性副溶血弧菌的有效手段。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 toxR TDH TRH 三重荧光定量PCR |
Establishment and application of a triple Real-time PCR for detection of Vibrio parahaemolyticus |
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| WAN Ying,LING Jiao,WANG Quan,SUN Weidong,JIANG Wei.Establishment and application of a triple Real-time PCR for detection of Vibrio parahaemolyticus[J].Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2019(1):60-66. |
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| Authors: | WAN Ying LING Jiao WANG Quan SUN Weidong JIANG Wei |
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| Institution: | (College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;Shanghai Veterinary Research Institute,CAAS,Shanghai 200241,China) |
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| Abstract: | WAN Ying;LING Jiao;WANG Quan;SUN Weidong;JIANG Wei(College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;Shanghai Veterinary Research Institute,CAAS,Shanghai 200241,China) |
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| Keywords: | Vibrio parahaemolyticus toxR tdh trh triple Real-time PCR |
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