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烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用
引用本文:龙亚芹,王万东,左瑞娟,李凡,尹朝先,陈海如. 烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用[J]. 农业生物技术学报, 2011, 19(2). DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.023
作者姓名:龙亚芹  王万东  左瑞娟  李凡  尹朝先  陈海如
作者单位:1. 云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室,昆明650201;云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所,保山678025
2. 云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所,保山,678025
3. 云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室,昆明,650201
摘    要:为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白.用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清.DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测.本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件.

关 键 词:烟草丛顶病毒(TBTV)  ORF3和ORF4  原核表达  抗血清制备

Prokaryotic Expression,Antiserum Preparation and Application of ORF3 and ORF4 from Tobacco bush top virus(TBTV)
Long Yaqin,Wang Wandong,Zuo Ruijuan,Li Fan,Yin Chaoxian,Chen Hairu. Prokaryotic Expression,Antiserum Preparation and Application of ORF3 and ORF4 from Tobacco bush top virus(TBTV)[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2011, 19(2). DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.023
Authors:Long Yaqin  Wang Wandong  Zuo Ruijuan  Li Fan  Yin Chaoxian  Chen Hairu
Abstract:
Keywords:
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