| 靶向山羊△FosB基因的shRNA重组干扰腺病毒的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 郑惠玲,安俊辉,闫林慧,杨振宇,祝珍珍.靶向山羊△FosB基因的shRNA重组干扰腺病毒的制备及鉴定[J].农业生物技术学报,2011,19(2). |
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| 作者姓名： | 郑惠玲 安俊辉 闫林慧 杨振宇 祝珍珍 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项，中央高校基本科研业务费专项基金 |
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| 摘 要： | △FosB作为FosB的一种截短型,具有广泛的生物学功能,在脂、钙沉积和药物成瘾等方面有重要作用.本研究采用RNA干扰技术,通过制备重组干扰腺病毒对山羊(Caprar hircus)△FosB基因进行沉默,进一步研究山羊△FosB基因在脂、钙沉积方面的相关功能及作用机制.实验采用BLOCK-iT slaRNA腺病毒干扰系统,将预先设计好的寡聚shRNA-492/572经退火复性后克隆入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中.经干扰效率检测后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-572与病毒骨架质粒pAD/PL-DEST进行同源重组,获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-572,并转染HEK-293细胞,经包装、扩增后即可产生干扰腺病毒AD-△FosB-572,TCID50法测定其滴度为1.58x109 PFU/mL.用AD-△FosB-572感染山羊的乳腺上皮细胞(MOI=200),经Western blot及实时定量PCR检测证明在病毒感染24、48和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中△FosBmRNA表达量分别下调了45%,73%和81%,其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显,可用于后续的基因功能研究.
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| 关 键 词： | 山羊 △FosB RNA干扰 腺病毒 |
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