| 猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价 |
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| 引用本文： | 吴正常,殷学梅,夏日炜,孙寿永,朱国强,吴圣龙,包文斌.猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价[J].畜牧兽医学报,2015(3):491-496. |
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| 作者姓名： | 吴正常 殷学梅 夏日炜 孙寿永 朱国强 吴圣龙 包文斌 |
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| 作者单位： | 扬州大学动物科学与技术学院;扬州大学兽医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31172183;31140027);转基因生物新品种培育科技重大专项(2014ZX08006-001B);江苏省科技支撑计划(BE2012330;BE2013345;BE2014357);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) |
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| 摘 要： | 本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体,为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因(GenBank登录号:EF436278)全长编码区序列,设计其特异性发夹siRNA干扰片段,并将其克隆插入pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR干扰载体中,构建猪BPI基因4个干扰siRNA表达载体RB1、RB2、RB3和RB4,1个阴性对照NC,并通过PCR和测序进行验证,构建成功后转染猪小肠上皮细胞IPEC-J2并检测其干扰效率。结果发现,所构建的4个特异性siRNA载体均可显著降低猪BPI基因mRNA表达(P0.05),其中RB4载体干扰效果最好,其干扰效率达到69%。本研究成功筛选可靶向干扰猪BPI基因的高效siRNA,为今后在细胞水平进一步研究BPI基因对猪肠道革兰阴性菌感染抗性的作用及其机制奠定了试验基础。
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| 关 键 词： | 猪 BPI基因 siRNA载体 RNA干扰 |
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