猪急性腹泻综合征病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种鉴定猪急性腹泻综合征病毒（SADS-CoV）的RT-PCR方法，根据NCBI登录的SADS-CoV N基因保守区域序列，设计了3对引物（P1、P2和P3），通过对SADS-CoV及其他6种病毒进行检测，筛选出最合适的引物，然后对退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、rTaq DNA聚合酶浓度和循环次数等反应条件进行了优化。结果显示，P3引物对SADS-CoV特异性最好，与其他病毒无交叉反应。敏感性试验显示，该方法最低检测限可达9.55×102 copies/μL；重复性试验显示该方法重复性良好。运用建立的RT-PCR方法，对广东省的21份临床样品进行检测，结果检出SADS-CoV阳性样品4份，阳性样品的测序结果与其RT-PCR完全一致。结果表明，本研究成功建立了一种鉴定SADS-CoV的RT-PCR方法，且该方法具有检测快速、成本廉价、特异性强、敏感性高和重复性好的优点，可以用于SADS-CoV的临床诊断。

Establishment and Application of a RT-PCR Assay for Detection of Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus