CELO病毒fiberl基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定

根据鸡胚致死孤儿(CELO)病毒Phelps株的fiberl基因(GenBank序列号u46933)序列设计了1对引物，采用PCR扩增CELO病毒fiberl基因C端(包含Knob—S区)的部分片段，并将其克隆到质粒表达载体pGEX-6P—1，获得的阳性克隆命名为pGEX—AF807。序列分析表明，所获得的DNA片段核苷酸序列与CELO病毒Phelps株的fiberl基因序列完全一致。将pGEX—AF807转化大肠埃希氏菌DH5a，经37C、0．6mmol／L IPTG诱导表达5h，SDS—PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀。结果显示，目的蛋白以包涵体形式存在，蛋白分子质量约为54．6ku，目的蛋白量占菌体总蛋白的35．7％。用CELO病毒多克隆血清做Western blotting试验，结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。