鸡importin β1基因真核表达载体的构建及亚细胞定位

根据GenBank已发表的鸡importinβ1基因序列,设计合成一对特异性引物从重组克隆质粒pCR2.1-importin β1中扩增鸡importinβ1基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1构建重组真核表达载体pEGFP-importin β1。利用脂质体转染法将pEGFP-importin β1转染DF-1细胞,24h后分别检测重组蛋白EGFP-importin β1在细胞中的表达及亚细胞定位情况。结果表明,成功构建了鸡importin β1基因的重组真核表达载体pEGFP-importin β1;将其转染DF-1细胞后得到与预期大小相符的EGFP-importin β1重组蛋白条带,荧光显微镜观察显示重组蛋白主要定位在细胞核。研究结果为进一步开展鸡importin β1蛋白与相关家禽病毒蛋白的相互作用研究奠定了工作基础。