SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究 |
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作者姓名: | 刘明莉 夏平安 党占国 王中明 邱璜 卢高峰 李伟娟 |
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作者单位: | 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002 |
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摘 要: | PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框(open reading frames,ORFs),其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白:糖基化囊膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。糖基化囊膜蛋白(E)又称GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR,又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变,而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后,采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失,对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆,旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。
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关 键 词: | PCR法 基因片段 跨膜区 融合蛋白 重叠区扩增基因拼接法 PCR技术 GP5蛋白 正链RNA病毒 |
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