农杆菌vbp1基因表达调控分子机理的研究

为了提高农杆菌介导的T-DNA转化效率,本研究在实验中采用了生物信息学的方法,来研究农杆菌的vbp1基因表达调控的机理。利用TESS网站和Prokaryote Promoter Prediction网站,检索到tgntataat、fnrbsub、sigma A_breve、crp和sigma38这些调控因子可以调节vbp1基因,因此vbp1基因启动子的大小可以确定下来。然后通过插入绿色荧光基因(gfp)作为标记基因构建三个重组质粒PSET1、PSET2和PSET3来分析这些转录因子的调控序列,将调控序列进行突变,判断vbp1启动子是否能够启动荧光基因的表达。结果是sigmaA_breve的结合位点去除后会削弱荧光基因的表达,而tgntataat、fnrbsub、crp和sigma38这几个调控因子结合位点突变之后,一种可以增强荧光基因的表达,另一种不能表达荧光基因。因此,我们可以通过调节vbp1基因启动子的调控提高农杆菌的转运效率。