高分辨率熔解曲线技术在大豆基因分型中的应用

高分辨熔解曲线(high resolution melting, HRM)分析技术是一种高效,快速,便捷的核苷酸检测方法。本实验从染料用量、模板浓度、产物片段长度3个方面探索了适宜HRM分析的最佳条件,并利用HRM技术对单核苷酸(single nucleotide polymorphism, SNP)及插入/缺失(insertion-deletion, InDel)检测及基因分型等方面进行了分析。结果表明:10μL反应体系中,20×Eva Green饱和染料加入0.1~0.3μL,模板浓度加入10~200 ng不影响HRM分辨率;扩增产物长度在70~190 bp范围内,插入/缺失片段长度3~13 bp范围内,高分辨熔解曲线均有较好的分辨效果。利用HRM分析技术检测分析F4个体基因型,结果与PAGE电泳分析完全一致。本实验结果说明,HRM技术与传统凝胶电泳基因分型方法相比,具有操作简单、分辨率高、准确快速、成本低等优点,是基因型鉴定的最佳选择。