| 猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORFl和ORF2基因的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 韩凌霞,陈艳,崔尚金,王云峰,仇华吉,童光志.猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORFl和ORF2基因的克隆与表达[J].中国预防兽医学报,2004,26(1):10-13. |
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| 作者姓名： | 韩凌霞 陈艳 崔尚金 王云峰 仇华吉 童光志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 黑龙江哈尔滨，150001，黑龙江哈尔滨，150001，黑龙江哈尔滨，150001，黑龙江哈尔滨，150001，黑龙江哈尔滨，150001，黑龙江哈尔滨，150001 |
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| 基金项目： | 黑龙江省重大科技攻关项目(GA02B501)资助~~ |
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| 摘 要： | 猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV＿2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX＿6p＿1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS＿PAGE结果,重组质粒pPRO＿Cap和pPRO＿Rep以及pGEX＿ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV＿2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX＿ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV＿2感染用候选抗原。
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| 关 键 词： | PCV-2 原核表达 诊断抗原 |
| 文章编号： | 1008-0589(2004)01-0010-04 |
| 修稿时间： | 2003年4月16日 |
Genomic sequence determination of PCV-2 and expression of ORF1 and ORF2 genes in E. Coli |
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| HAN Ling-xia,CHEN Yan,CUI Shang-jin,WANG Yun-feng,QIU Hua-ji,TONG Guang-zhi Research Institute,CAAS,Harbin.Genomic sequence determination of PCV-2 and expression of ORF1 and ORF2 genes in E. Coli[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2004,26(1):10-13. |
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| Authors: | HAN Ling-xia CHEN Yan CUI Shang-jin WANG Yun-feng QIU Hua-ji TONG Guang-zhi Research Institute CAAS Harbin |
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| Institution: | HAN Ling-xia,CHEN Yan,CUI Shang-jin,WANG Yun-feng,QIU Hua-ji,TONG Guang-zhi* Research Institute,CAAS,Harbin 150001) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCV-2 prokaryotic expression diagnostic antigen |
| 本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录！ |
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