MTT-分光光度法快速测定地衣芽孢杆菌发酵液活菌数的研究

试验以地衣芽孢杆菌发酵液为研究对象，旨在建立1种快速、稳定、灵敏度高的活菌计数方法，并探讨MTT-分光光度法用于活菌计数的可行性。试验筛选显色反应终止液最适浓度、最适反应波长、最适反应时间、最适菌液浓度等，考察不同培养基、培养液保存后和其他干扰物对测定结果的影响，并对比MTT-分光光度法与稀释平板法测定发酵菌液中地衣芽孢杆菌活菌数结果的关系。结果显示，在最大吸收波长550 nm处测定OD值，反应时间为1 h，反应终止液为1.0 mol/L盐酸，MTT添加量为0.2 mL，新鲜的地衣芽孢杆菌发酵液OD值>0.04。菌液浓度为10⁸～10⁹ CFU/m L时，OD_{550 nm}值与稀释平板法得到的活菌数具有很好的线性对应关系，当菌液浓度<10⁸ CFU/mL时对应关系不再成立。研究表明，活菌量>10⁸ CFU/mL时，MTT-分光光度法不受地衣芽孢杆菌生长阶段的影响，可准确计量地衣芽孢杆菌发酵液活菌量相对应的吸光度，从而快速、准确地检测活菌数。