原花青素对体外培养牛卵泡颗粒细胞增殖及其类固醇合成与分泌功能的影响

【目的】探究原花青素（proanthocyanidins，PC）对体外培养的牛卵泡颗粒细胞（granulosa cells，GCs）增殖及其类固醇合成与分泌功能的影响。【方法】采集性成熟荷斯坦奶牛卵巢组织，分离卵泡GCs，使用免疫荧光对其进行鉴定。用不同质量浓度（10，30，50，70和90 μg/mL）的PC对牛卵泡GCs作用不同时间（12，24和48 h）后，测定GCs存活率。以β-actin为内参基因，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测10，50和90 μg/mL PC对牛卵泡GCs周期相关基因（CCND1和CCND2）、凋亡相关基因（caspase-3、caspase-9和Bim）以及类固醇激素合成相关基因（CYP19A1、CYP11A1、STAR和3β-HSD）相对表达量的影响,并检测培养上清液中类固醇激素（雌二醇（E₂）和孕酮（P₄））的浓度。【结果】分离获得了纯度较高的牛卵泡GCs。当PC质量浓度为50 μg/mL且培养24 h时，牛卵泡GCs的存活率最高。当PC质量浓度为50 μg/mL时，牛卵泡GCs周期相关基因CCND1和CCND2相对表达量均极显著升高（P＜0.01）；凋亡相关基因caspase-3和caspase-9相对表达量均极显著降低（P＜0.01），Bim相对表达量显著降低（P＜0.05）；E₂和P₄浓度均极显著增加（P＜0.01）；类固醇激素合成相关基因CYP19A1、CYP11A1、STAR和3β-HSD相对表达量均极显著升高（P＜0.01）。当PC质量浓度为10 μg/mL时，牛卵泡GCs凋亡相关基因caspase-3的相对表达量显著降低（P＜0.05）；P₄浓度显著增加（P＜0.05）；CYP19A1和3β-HSD相对表达量均显著升高（P＜0.05），CYP11A1和STAR相对表达量均极显著升高（P＜0.01）。当PC质量浓度为90 μg/mL时，E₂浓度显著增加（P＜0.05），P₄浓度极显著增加(P＜0.01）；CYP19A1、CYP11A1、STAR和3β-HSD相对表达量均极显著升高（P＜0.01）。【结论】50 μg/mL PC通过促进牛卵泡GCs周期相关基因的表达和抑制凋亡相关基因的表达而促进牛卵泡GCs的增殖。10～90 μg/mL PC通过促进类固醇激素合成相关基因的表达而促进了牛卵泡GCs合成和分泌类固醇激素，进而影响牛卵泡GCs类固醇激素合成与分泌功能。

Effect of proanthocyanidins on proliferation of bovine follicular granulosa cells cultured in vitro and their steroid synthesis and secretion functions