大黄鱼 DIGIRR通过抑制MyD88-NF-κB的激活参与免疫调控

为研究大黄鱼双免疫球蛋白白细胞介素1受体相关分子 (double immunoglobulin interleukin-1 receptor-related molecule, DIGIRR) 在免疫反应中的作用，本实验克隆了大黄鱼DIGIRR (LcDIGIRR) 的编码区序列；采用荧光定量PCR (qPCR) 对大黄鱼各组织及免疫刺激后的脾脏、头肾等组织及大黄鱼肾细胞系 (LCK) 中的LcDIGIRR表达情况进行了检测；构建了重组表达质粒pTurboGFP-DIGIRR及pcDNA3.1-DIGIRR，分别以绿色荧光蛋白 (GFP) 为报告基因及双荧光素酶报告系统，研究了LcDIGIRR的亚细胞定位及过表达后对NF-κB启动子活性的调控。结果显示，LcDIGIRR的开放读码框 (ORF) 包含1575 bp核苷酸，编码 524 个氨基酸，理论分子量为59.4kDa、等电点 (pI) 为5.76，N端包含2个免疫球蛋白 (Ig) 结构域，1个跨膜区及1个Toll/白细胞介素-1受体 (TIR) 结构域，属于保守的硬骨鱼类DIGIRR家族；qPCR分析表明LcDIGIRR在大黄鱼多组织均有表达，其中在肠道中表达量最高；采用变形假单胞菌 (Pseudomonas plecoglossicida) 及脂多糖 (LPS)、鞭毛蛋白、多聚肌-胞苷酸 poly (I:C)]等分别进行体内与体外刺激，均可诱导其表达量显著增加 (P < 0.05)；亚细胞定位结果显示LcDIGIRR主要存在于细胞的膜质区；过表达LcDIGIRR能够显著抑制NF-κB及MyD88介导的NF-κB的转录激活 (P < 0.05)。以上结果表明LcDIGIRR可能通过抑制NF-κB的转录激活，在大黄鱼的免疫反应中发挥负调控作用。