罗非鱼无乳链球菌gap基因的原核表达及免疫原性研究

试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的gap蛋白与弗氏佐剂乳化腹腔注射免疫罗非鱼,以间接ELISA法检测血清效价并使用GBS进行攻毒试验。结果显示,PCR扩增出1 011 bp大小的单条带gap基因,与预期一致;重组载体pET-28a-gap在23℃、0.4 mmol/L IPTG、12 h条件下成功表达49.8 ku的可溶性蛋白;ELISA检测显示,重组蛋白gap能够产生较高的血清抗体效价水平,对GBS攻毒后的罗非鱼相对保护率为64.1%。研究表明,重组蛋白gap具有较好的免疫原性,为鱼类的链球菌病的预防提供新的理论依据。