| FTA卡保存对虾传染性皮下和造血组织坏死病毒DNA洗脱方法的优化 |
| |
| 作者姓名： | 连新宇 王秀华 李晨 张庆利 苟紫玥 吕若萱 杨冰 |
| |
| 作者单位： | 浙江海洋大学水产学院 浙江 舟山 316022；中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266072;中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266073;中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266074;中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266075;中国水产科学研究院黄海水产研究所
青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 农业农村部海水养殖病害防治重点实验室
青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室 山东 青岛 266076 |
| |
| 摘 要： | 传染性皮下和造血组织坏死病毒(infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus, IHHNV)是危害虾类健康养殖的重要病原，为寻找一种快捷保存及分离IHHNV DNA的方法，为后续研究提供完整的核酸材料，选用FTA (flinders technology associates)卡为保存介质，以FTA纯化试剂、TE (Tris-EDTA)缓冲液及去离子水为基础洗脱液，设计7种FTA卡黏附DNA洗脱方法，通过荧光定量PCR检测方法检验不同核酸洗脱分离效果及最低的点膜核酸量。结果显示，于4 mm2的FTA卡上，点样体积为2.5 μL，用洗脱液作为模板时，最低点膜核酸浓度需要1.47×104 copies/μL以上，可获得最佳的检测灵敏度和100%检出率的洗膜方法为50 μL TE缓冲液于95 ℃下浸洗5 min；用膜片做模板，点膜核酸浓度需要1.82×103 copies/μL以上，室温(20~25 ℃)条件下，用FTA纯化试剂洗脱3次，再用TE缓冲液洗脱2次，洗脱时间均为5 min，可获得最佳的检测灵敏度和100%的准确度。以FTA卡保存对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)、虾十足目虹彩病毒1 (Decapod iridescent virus 1, DIV1)、偷死野田村病毒(covert mortality noda virus, CMNV)、致急性肝胰腺坏死副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VpAHPND)核酸，测试所建洗脱方法的效果，证实了该方法对其他虾类病原核酸的洗脱具有通用性。该研究给出了FTA卡保存和洗脱IHHNV DNA的适用性方案，为野外对虾样品采集、病毒核酸样品跨区域传递的保存和运输条件提供了科学数据。
|
| 关 键 词： | IHHNV FTA卡 洗脱方法 优化 |
| 收稿时间： | 2022/12/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/2/1 0:00:00 |
Optimization of DNA elution method of infectious hypodermic and hematopoietic necrosis virus preserved by FTA card |
| |
| Institution: | College of Fisheries, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China; Yellow Sea Fisheries Research
Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao Marine Science and Technology Center; Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Qingdao 266071, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | IHHNV Flinders technology associates cards Elution method Optimization |
|
| 点击此处可从《》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《》下载免费的PDF全文 |
