新疆大叶紫花苜蓿BADH基因转化体系的研究

以新疆大叶苜蓿（Medicago sativa ‘Xinjiang Daye’）叶片作为转化受体，利用农杆菌介导法将从梭梭（Haloxylon ammodendron）中获得的甜菜碱醛脱氢酶基因（BADH）转化紫花苜蓿，研究选择剂卡那霉素对愈伤组织分化的影响，并采用正交试验设计优化了影响紫花苜蓿转化的4个主要因子，建立了农杆菌介导的紫花苜蓿高效转化体系，获得了转基因植株。结果表明：卡那霉素在愈伤组织分化培养时的上限浓度以50 mg·L^-1为宜；转化过程中当浸染时间为5 min，菌液浓度OD₆₀₀为0.2，外植体预培养6 d，共培养后清洗外植体的头孢雷素（Cef）浓度为800 mg·L^-1是最佳转化方案，抗性芽分化率达到65.5%；4个因子中菌液浓度对转化率影响最大，清洗外植体的Cef浓度和浸染时间影响次之，外植体预培养时间的影响最小。经PCR和RT-PCR检测，初步证明了BADH基因已经整合到紫花苜蓿中，转化率为16.0%。