| 鸡Dazl基因的克隆及其亚细胞定位研究 |
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| 引用本文： | 郑蒙蒙,李伟,施青青,王丹,黄晓梅,李碧春.鸡Dazl基因的克隆及其亚细胞定位研究[J].中国家禽,2013,35(6). |
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| 作者姓名： | 郑蒙蒙 李伟 施青青 王丹 黄晓梅 李碧春 |
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| 作者单位： | 扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，江苏省研究生培养科研创新计划项目，江苏省"六大人才高峰"项目:江苏省高校自然科学重大基础研究项目 |
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| 摘 要： | 为克隆鸡Dazl(Deleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能.提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL.采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48 h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况.结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870 bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99％,编码氨基酸完全一致.酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功.转染48 h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949 bp特异条带和59.7 ku的融合蛋白.荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核.
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| 关 键 词： | 鸡 Dazl 真核表达载体 绿色荧光蛋白 亚细胞定位 |
Cloning and Subcellular Localization of Dazl Gene in Chicken |
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| ZHENG Mengmeng
,
LI Wei
,
SHI Qingqing
,
WANG Dan
,
HUANG Xiaomei
,
LI Bichun.Cloning and Subcellular Localization of Dazl Gene in Chicken[J].China Poultry,2013,35(6). |
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| Authors: | ZHENG Mengmeng LI Wei SHI Qingqing WANG Dan HUANG Xiaomei LI Bichun |
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