| 野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定 |
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| 引用本文： | 林观平,李树梅,熊亮,周克元.野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定[J].湛江医学院学报,2008,26(2):115-119. |
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| 作者姓名： | 林观平 李树梅 熊亮 周克元 |
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| 作者单位： | 广东医学院生物化学与分子生物学教研室 广东湛江524023(林观平，周克元)，四川省攀枝花市十九冶医院妇产科 四川攀枝花617023(李树梅)，赣南医学院预防医学教研室 江西赣州341000(熊亮) |
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| 基金项目： | 广东省重点学科建设资助项目 |
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| 摘 要： | 目的为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法。方法用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coliBJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后,转染293细胞,检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后,测其感染率。结果获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-PTEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光。通过Western blot可检测到293细胞中PTEN蛋白高效表达。Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞,感染率达80%~90%。结论PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高。
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| 关 键 词： | 重组腺病毒 PTEN 基因治疗 |
| 文章编号： | 1005-4057(2008)02-0115-05 |
| 修稿时间： | 2008年1月18日 |
Improvement of construction of wild-type PTEN gene recombinant adenovirus expression vector and its identification |
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| LIN Guan-ping,LI Shu-mei,XIONG Liang,ZHOU Ke-yuan.Improvement of construction of wild-type PTEN gene recombinant adenovirus expression vector and its identification[J].Journal of Guangdong Medical College,2008,26(2):115-119. |
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| Authors: | LIN Guan-ping LI Shu-mei XIONG Liang ZHOU Ke-yuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant adenovirus PTEN gene therapy |
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