| 高表达GFP-PBP1b融合蛋白的猪链球菌菌株的构建及PBP1b蛋白细胞定位的研究 |
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| 引用本文： | 武柳君,卫东,高广娟,陈平,刘思国,张跃灵.高表达GFP-PBP1b融合蛋白的猪链球菌菌株的构建及PBP1b蛋白细胞定位的研究[J].中国预防兽医学报,2023(11):1101-1107. |
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| 作者姓名： | 武柳君 卫东 高广娟 陈平 刘思国 张跃灵 |
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| 作者单位： | 1. 新疆农业大学动物医学学院;2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/动物细菌病创新团队 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2021YFD1800401)；;国家自然科学基金(32172853)；;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302022001)； |
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| 摘 要： | 为鉴定猪链球菌(Streptococcus suis) A型青霉素结合蛋白PBP1b在S.suis中的细胞定位，本研究经PCR扩增S.suis pbp1b基因融合位点上下游序列UP和DN、强启动子Peno基因片段及绿色荧光蛋白(GFP) gfp基因片段，再通过重叠延伸PCR扩增构建融合片段UP-Peno-GFP-DN。利用同源重组的方法将UP-Peno-GFP-DN转化含反向筛选标记的PSS-pbp1b中间菌株，经含7%蔗糖的TSAS平板筛选，挑单菌落进行PCR及测序鉴定。PCR及测序鉴定结果显示，获得的重组菌株中Peno-gfp片段替换了PSS-pbp1b中的PSS片段，表明融合强启动子Peno、GFP及PBP1b (GFP-PBP1b)的重组菌株P-GFP-pbp1b正确构建。以S.suis 05ZYH33株和本实验室前期构建的GFP-pbp1b为对照，培养P-GFP-pbp1b菌株并测定OD600nm值，绘制各菌株的生长曲线；采用western bl...
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| 关 键 词： | 猪链球菌 荧光蛋白融合菌株 A型青霉素结合蛋白 PBP1b 细胞壁肽聚糖合成 |
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