| 致对虾急性肝胰腺坏死病弧菌SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 张明辉,安伟,张海强.致对虾急性肝胰腺坏死病弧菌SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报,2023(10):1032-1037. |
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| 作者姓名： | 张明辉 安伟 张海强 |
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| 作者单位： | 1. 上海市水产研究所上海市水产技术推广站;2. 广州嘉检医学检测有限公司 |
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| 摘 要： | 为了建立一种敏感、特异的致对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)的一类弧菌(VpAHPND)的荧光定量PCR(qPCR)检测方法，本研究根据Gen Bank中该类弧菌(本研究所用的VpAHPND为副溶血弧菌变异株，下同) PirB毒素基因(KU145397)，设计q PCR扩增引物，并采用该引物经PCR扩增PirB基因片段，构建重组质粒p MD18-T-PirB并经PCR和测序鉴定正确后作为质粒标准品。以10倍倍比稀释的重组质粒标准品进行q PCR扩增，建立标准曲线，并经反应条件优化初步建立了检测该类VpAHPND的SYBR Green I q PCR方法。以白斑综合征病毒、传染性皮下及造血组织坏死病毒、虾虹彩病毒、虾肝肠胞虫及该VpAHPND的基因组DNA为模板，采用本研究建立的SYBR Green I q PCR方法检测，评估该方法的特异性；以8.3×101拷贝/μL～8.3×108拷贝/μL的质粒标准品作为模板，利用本研究建立的SYBR Green I ...
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| 关 键 词： | 急性肝胰腺坏死病 SYBR Green I 荧光定量PCR 弧菌 |
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