| 猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 路斌,王一成,吴润,袁秀芳,徐丽华,李军星,王朝文. 猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 华北农学报, 2010, 25(6) |
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| 作者姓名： | 路斌 王一成 吴润 袁秀芳 徐丽华 李军星 王朝文 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学,甘肃,兰州,730070;浙江省农业科学院,畜牧兽医研究所,浙江,杭州,310021 |
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| 基金项目： | 浙江省重大科技专项农业项目 |
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| 摘 要： | 通过对Genbank登录的CSFV、PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析,找出CSFV的E2基因,PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域[1]。利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物,通过对PCR反应条件的优化,确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度,建立了多重二温式PCR方法检测CSFV、PRRSV和JEV。其扩增的目的片断大小分别为CSFV(482 bp)、PRRSV(576 bp)和JEV(375 bp),将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,从而大大节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒病进行检测。用50份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。
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| 关 键 词： | CSFV PRRSV JEV 多重二温式PCR |
Establishment and Application of Multiplex Two-step RT-PCR for Detection of Swine Main RNA Virus Pathogens |
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| LU Bin,WANG Yi-cheng,WU Run,YUAN Xiu-fang,XU Li-hua,LI Jun-xing,WANG Zhao-wen. Establishment and Application of Multiplex Two-step RT-PCR for Detection of Swine Main RNA Virus Pathogens[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2010, 25(6) |
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| Authors: | LU Bin WANG Yi-cheng WU Run YUAN Xiu-fang XU Li-hua LI Jun-xing WANG Zhao-wen |
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