布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子BPE123和BPE275基因的原核表达与鉴定 |
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作者姓名: | 孙志华 张 辉 刘来珍 等 |
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作者单位: | 石河子大学 动物科技学院,动物疾病防控兵团重点实验室,石河子大学 动物科技学院,动物疾病防控兵团重点实验室,石河子大学 动物科技学院,动物疾病防控兵团重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31360610);新疆生产建设兵团国际合作项目(2013BC005);石河子大学杰出青年项目(2012ZRKXJQ02) |
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摘 要: | 【目的】克隆布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子BPE123和BPE275的基因并进行诱导表达。【方法】从牛种布鲁氏菌2308株基因组中PCR扩增BPE123和BPE275基因片段,亚克隆到pGEM-T Easy载体中并测序。将BPE123和BPE275基因克隆至融合表达载体pET-28a,构建表达重组质粒pET-28a-BPE123和pET-28aBPE275,在大肠杆菌中进行诱导表达,Western blot分析重组蛋白His-BPE123和His-BPE275的免疫学特性。【结果】PCR扩增获得了462bp的BPE123基因片段和762bp的BPE275基因片段,成功构建了pET-28a-BPE123、pET-28a-BPE275原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BPE123和BPE275蛋白,经SDS-PAGE检测,重组融合蛋白BPE123、BPE275的分子质量分别约为22和31ku,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别表达的蛋白。【结论】克隆了分泌蛋白BPE123、BPE275基因片段,并成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子BPE123和BPE275。
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关 键 词: | 布鲁氏菌;Ⅳ型分泌系统;效应蛋白 |
收稿时间: | 2014-09-29 |
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