聚糖内切酶EGⅢ的克隆及其在酵母中的表达(摘要) |
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引用本文: | 国震宇,王丕武,曲靖,付永平,姚丹,付玉芹.聚糖内切酶EGⅢ的克隆及其在酵母中的表达(摘要)[J].农业科学与技术,2009(6):47-49,52. |
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作者姓名: | 国震宇 王丕武 曲靖 付永平 姚丹 付玉芹 |
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作者单位: | 吉林农业大学农学院,吉林吉林130118 |
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摘 要: | 目的]构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌。方法]采用RT-PCR方法克隆了绿色木霉(Trichoderma viride)AS313711的葡聚糖内切酶Ⅲ(EGⅢ)的cDNA,测序后构建到酵母表达载体pESP-2上,并通过电击法将其转到酵母感受态细胞中去,得到酵母表达转化子。通过DNS法测定该转化子在不同温度、不同pH值下酶活力的大小。结果]EGⅢ的cDNA开放阅读框长度为1 257 bp,编码418个氨基酸,推测蛋白质分子量为44.1×10~3。在pH值为4.9、温度在60℃条件下,EGⅢ酶活力最高,相对酶活为100%。结论]获得了高表达效率的EGⅢ-T-pESP-2酵母表达载体,其表达活性要比天然的酶高出3~5倍,只要调节好温度、pH值的关系,可提高纤维素葡聚糖内切酶的下游转化纤维素效率,在大规模生产中生产出大量的葡萄糖。
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关 键 词: | 绿色木霉 葡聚糖内切酶Ⅲ 大肠杆菌 转化 酶活力 |
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