| 番茄斑萎病毒NASBA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 吴兴海,陈长法,封立平,邵秀玲. 番茄斑萎病毒NASBA检测方法的建立[J]. 植物保护学报, 2016, 43(6): 900-906. DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.06.003 |
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| 作者姓名： | 吴兴海 陈长法 封立平 邵秀玲 |
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| 作者单位： | 山东出入境检验检疫局,青岛,266002 |
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| 基金项目： | 山东省科技专项（2011SDH204），国家质检总局科技计划项目（2012IK281，2013IK173） |
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| 摘 要： | 为建立一种快速检测番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的方法,以TSWV-CP1/TSWV-CP2为引物对TSWV的N基因进行PCR扩增及序列测定,在TSWV N基因的高度保守区设计特异性扩增引物NA-P1/NA-P2进行核酸序列依赖性扩增(NASBA)反应,并对NASBA方法的特异性和灵敏度进行验证。结果表明,建立的NASBA方法最佳反应时间为1.5 h。该方法特异性较好,只有TSWV阳性样品中出现了预期大小为235 bp的扩增产物,与烟草环斑病毒(Tobacco ring spot virus,TRSV)、番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow curl virus,ToYCLV)无交叉反应。灵敏度验证中,实时荧光RT-PCR的灵敏度最高,为1.56×10~(-5)ng/μL感病植物RNA模板,NASBA次之,为1.56×10~(-4)ng/μL,普通RT-PCR最低,为1.56×10~(-3)ng/μL。在对9份实际样品检测中,NASBA的阳性检出率与实时荧光RT-PCR、普通RT-PCR相同,均为33%,高于ELISA检测的22%。表明NASBA方法适用于实际样品检测,可对TSWV进行快速检测。
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| 关 键 词： | 番茄斑萎病毒 核酸序列依赖性扩增 检测 |
| 收稿时间： | 2015-01-19 |
Development of a nucleic acid sequence-based amplification assay for detection of Tomato spotted wilt virus |
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| Wu Xinghai,Chen Changf,Feng Liping and Shao Xiuling. Development of a nucleic acid sequence-based amplification assay for detection of Tomato spotted wilt virus[J]. Acta Phytophylacica Sinica, 2016, 43(6): 900-906. DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.06.003 |
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| Authors: | Wu Xinghai Chen Changf Feng Liping Shao Xiuling |
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| Affiliation: | Shandong Exit-Entry Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, Shandong Province, China,Shandong Exit-Entry Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, Shandong Province, China,Shandong Exit-Entry Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, Shandong Province, China and Shandong Exit-Entry Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, Shandong Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tomato spotted wilt virus nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) detection |
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