| 大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析 |
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| 引用本文： | 杨帅,王玲,赵奎军,韩岚岚.大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析[J].中国农业科学,2012,45(18):3755-3763. |
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| 作者姓名： | 杨帅 王玲 赵奎军 韩岚岚 |
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| 作者单位： | 1.东北农业大学农学院，哈尔滨 150030 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-04);国家公益性行业(农业)专项(201103002) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因，了解该酶的分子特性，为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术，克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列，命名为AgCarE，利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析，以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达，并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明，羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp，编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08，蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434，5个N-联糖基化位点，具备羧酸酯酶的结构特征，属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组，经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测，在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白，以α-醋酸萘酯为底物，检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE，以α-醋酸萘酯为底物，检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液，有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用，为设计研发新型杀虫剂提供可能。
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| 关 键 词： | 大豆蚜 羧酸酯酶 基因克隆 活性分析 |
| 收稿时间： | 2012-01-04 |
Cloning,Expression and Activity Analysis of Carboxylesterase Gene from Aphis glycines(Hemiptera:Aphididae) |
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| YANG Shuai
,
WANG Ling
,
ZHAO Kui-jun
,
HAN Lan-lan.Cloning,Expression and Activity Analysis of Carboxylesterase Gene from Aphis glycines(Hemiptera:Aphididae)[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(18):3755-3763. |
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| Authors: | YANG Shuai WANG Ling ZHAO Kui-jun HAN Lan-lan |
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| Institution: | (College of Agriculture,Northeast Agricultural University,Harbin 150030) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aphis glycines carboxylesterase gene clone activity analysis |
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