亚洲玉米螟GOBP2的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

 【目的】克隆、序列分析和原核表达亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）GOBP2（OfurGOBP2)的cDNA。【方法】以亚洲玉米螟触角为材料，采用RT-PCR结合RACE方法克隆OfurGOBP2的cDNA序列，并在pGEX-4T-2/BL21（DE3）系统中进行原核表达, 进一步利用制备的抗体检测OfurGOBP2蛋白。【结果】从亚洲玉米螟触角中获得了GOBP2的cDNA序列（GenBank登录号为DQ673101），序列分析表明，OfurGOBP2开放阅读框489 bp，编码162个氨基酸残基，氨基酸序列中有6个保守的半胱氨酸位点，具有气味结合蛋白的典型特征。一致性分析显示，OfurGOBP2与其它鳞翅目昆虫GOBP2编码的氨基酸一致性较高，表明昆虫的GOBP2在分子进化过程中是保守的。进一步将OfurGOBP2与表达载体pGEX-4T-2连接，转入大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导成功表达了相对分子质量为41 kD的可溶性融合蛋白。SDS-PAGE分析和Western印迹检测结果表明，OfurGOBP2能够高效表达，并与预测的融合蛋白分子量相符。利用制备的多克隆抗体对亚洲玉米螟GOBP2进行Western-blot分析，证明其能够特异识别OfurGOBP2蛋白。【结论】成功克隆了编码并表达亚洲玉米螟气味结合蛋白GOBP2 的cDNA序列，并制备了多克隆抗体，可用于深入研究亚洲玉米螟GOBP2的结构和功能。