| 布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887基因缺失株的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 江雅丽,陈创夫,李志强,李默,李爽,王震,张欢,张辉,郭飞.布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887基因缺失株的构建及鉴定[J].动物医学进展,2016(5):30-37. |
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| 作者姓名： | 江雅丽 陈创夫 李志强 李默 李爽 王震 张欢 张辉 郭飞 |
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| 作者单位： | 1. 新疆石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832003;2. 新疆石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832000;3. 新疆石河子大学医学院,新疆石河子,832003 |
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| 基金项目： | 国家国际科技合作项目(2013DFA32380)；国家科技支撑计划子课题(2013BAI05B05)；国家自然科学基金项目(31572491；31502067)；自治区研究生教育创新计划科研创新项目(XJGRI2015040) |
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| 摘 要： | 为了构建羊布鲁菌16M(简称16M)的DK63-887基因缺失株(16MΔDK63-887),探讨该基因与16M介导自噬的关系。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那基因替换DK63-887基因,获得突变株16MΔDK63-887。将亲本株16M、疫苗株M5-90、突变株16MΔDK63-887在相同条件下振荡培养,观察其生长趋势变化;将各菌株置于不同外界环境中,观察其生存率;将各菌株侵染小鼠巨噬细胞,比较它们在宿主细胞内的生存能力及RT-qPCR检测自噬相关基因的表达。成功获得了布鲁菌DK63-887基因缺失株且在20代内未发生回复性突变现象。与亲本株相比,16MΔDK63-887在体外培养生长趋势与亲本株相似,只是细菌的浓度存在一定差异;突变株在外界应激条件下生存能力低于亲本株;侵染4h后缺失株胞内细菌数量明显下降;RT-qPCR检测到突变株的ULKI、Beclin1表达量均显著降低(P0.01),结果表明,布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白与16M介导的细胞自噬密切相关,为16M胞内寄生机制的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 布鲁菌 DK63-887基因 缺失株 自噬相关基因 |
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