铜绿假单胞菌F_(190—342)-I_(21—83)基因的克隆及其融合蛋白的原核表达

为了研究铜绿假单胞菌外膜蛋白F和I的重要表位,根据已公布的F和I基因序列设计2对特异性引物,以分离的水貂源铜绿假单胞菌ZHDL9基因组为模板,扩增重要的表位基因F_(190—342)(F1)和I_(21—83)(I2),并对得到的2段基因序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增所得F1和I2两段基因序列高度保守,不存在核苷酸的插入和缺失;通过融合PCR技术将得到的F1基因和I2基因无缝连接,得到651 bp的融合基因F1I2。将融合基因F1I2克隆至原核表达载体p ET-28a,成功构建了融合表达质粒p ET-28a-F1I2;将pET-28a-F1I2转化大肠杆菌BL21 (DE3),成功构建重组菌株BL21(pET-28a-F1I2),并对重组菌株进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,成功表达了融合蛋白F1I2,且融合蛋白能够被His镍柱纯化; Western Blotting检测表明,表达的融合蛋白F1I2与铜绿假单胞菌ZHDL9菌株感染的水貂血清具有较好的反应原性。