转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析

【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因（LDHA）酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性，为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列，并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子，经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123，再将重组表达载体p AUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株，采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d，期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力，以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170 bp，共编码389个氨基酸残基；以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子，其替换率高达58.35%。牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h，其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中，经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒...