| 鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定 |
| |
| 作者姓名： | 李梦茹 张文 段辰星 马良 栗朵朵 彭璟 梁晶晶 罗廷荣 李晓宁 |
| |
| 作者单位： | 1. 广西大学动物科学技术学院/广西高校动物疫病预防与控制重点实验室;2. 广西兽用生物制品工程研究中心 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31902311）~~； |
| |
| 摘 要： | 【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因（eIF4A1）并构建其原核/真核表达载体，探究其结构和生物学特性，为在体内外鉴定e IF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板，PCR扩增鼠源e IF4A1基因编码区（CDS）序列，然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体；利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定；同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞，通过Western blotting和间接免疫荧光（IFA）检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况；并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp，克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag，在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋...
|
| 关 键 词： | 鼠源 真核生物翻译起始因子(eIFs) eIF4A1基因 原核表达 真核表达 生物信息学分析 |
|
