大口黑鲈Nesfatin-1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

Nesfatin-1蛋白可以通过调节基因表达及信号通路途径影响鱼类的脂肪生成和代谢。为探究大口黑鲈(Micropterus salmoides) Nesfatin-1蛋白的生理功能，构建其原核表达质粒并进行蛋白表达纯化，制备了该蛋白的鼠源多克隆抗体。通过扩增Nesfatin-1蛋白的基因序列，构建原核表达载体获得pET32a-Nesfatin-1重组质粒。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达，镍离子亲和层析法纯化融合蛋白，并免疫Balb/c小鼠，获得针对Nesfatin-1的多克隆抗体。结果显示：大口黑鲈Nesfatin-1蛋白的基因序列为246 bp;Nesfatin-1融合蛋白在菌液上清液中的质量浓度为1.05 mg·mL^-1，相对分子质量约为30 kD;Western blot结果显示多克隆抗体能与重组蛋白特异性结合；间接ELISA检测该抗体效价达到1∶204 800以上；免疫组织荧光结果显示该抗体能特异性识别大口黑鲈肝胰腺中的蛋白，弥散性分布于肝胰腺中且血管周围呈强阳性反应。研究成功表达纯化出大口黑鲈Nesfatin-1融合蛋白，并制备了...