链霉菌S10遗传操作系统的优化

链霉菌StreptomycespratensisS10是分离自番茄叶霉病异常菌落上的一株生防菌，具有良好的生防应用价值。建立高效稳定的遗传操作系统对该生防菌进行基因定向改造、提高基因表达水平及深入研究其生防分子机制具有重要意义。本试验以具有安普霉素抗性基因标记的温敏型质粒pKC1139为载体，大肠杆菌Escherichia coli ET12567(pUZ8002)为供体菌，链霉菌S10为受体菌，通过接合转移的方法对其遗传操作系统进行优化。结果表明，选择高氏一号培养基为链霉菌S10接合转移的最适培养基，孢子50℃热激10 min，最适供受体比为1:100，安普霉素添加的最适浓度为25μg/mL，接合转移16 h后覆盖抗生素，添加MgCl2终浓度为15 mmol/L时接合转移效率最高，达到8.3×10-7。利用该遗传转化系统成功得到了一个调控基因的双交换突变株。获得链霉菌S10稳定高效的遗传操作系统，为进一步构建高产菌株和研究抑菌活性物质合成机理奠定了基础。