黄鳝卵原细胞移植研究

【目的】明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上，为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液，经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中，在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞的迁移、整合及增殖情况；采用组织形态学方法检测移植受体斑马鱼胚胎的发育情况，并以半定量PCR和荧光原位杂交检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3的表达情况。【结果】黄鳝卵巢经蛋白酶消化后，分离得到的卵原细胞悬液浓度为2.4×10⁶个/mL，以PKH26染色后在红色荧光下呈橙黄色。荧光追踪观察结果显示，在移植后0、12、24和48 hpt的受体斑马鱼胚胎中均能检测到供体黄鳝卵原细胞，且黄鳝卵原细胞迁移至受体斑马鱼胚胎的生殖嵴上进行整合及增殖，但72 hpt受体斑马鱼出膜后荧光信号丢失。组织形态学观察结果表明，黄鳝卵原细胞注入受体斑马鱼胚胎中48 hpt后其细胞质结构松散，生殖细胞由动物极向两端迁移而分化形成组织，72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别。半定量PCR检测结果显示，在48 ...