关岭牛MSTN基因3'-UTR与bta-miR-27b的靶向验证

【目的】明确关岭牛bta-miR-27b与肌肉生长抑制素基因（MSTN）的结合位点及靶向调控关系，为通过调控miRNA改良关岭牛产肉量提供理论依据，也为贵州地方黄牛分子遗传改良工作提供新的切入点。【方法】通过TargetScan预测牛MSTN基因3’端非翻译区（3’-UTR）的潜在miRNA结合区域及互作miRNA，对比关岭牛与不同关岭牛杂交品种的生理表型及MSTN基因和3’-UTR端miRNA表达差异，并分析bta-miR-27b在不同关岭牛杂交群体中的靶位点特异性。将MSTN基因3’-UTR序列野生型（WT）和3’-UTR序列突变型（MUT）分别克隆至pMIR-REPORT Luciferase(H306)载体构建重组双荧光素酶报告基因载体，与bta-miR-27b共转染293T细胞以验证bta-miR-27b与MSTN基因的作用关系，并利用实时荧光定量PCR验证bta-miR-27b对MSTN基因表达的影响。【结果】在牛MSTN基因3’-UTR端发现7个miRNA结合位点；关岭牛各系杂交品种的3个miRNA(bta-miR-27a-3p、bta-miR-27b和bta-miR-1...