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编码缺刻缘绿藻乙酰辅酶A羧化酶BCCP亚基的基因克隆与表达分析
引用本文:李燕,周志刚. 编码缺刻缘绿藻乙酰辅酶A羧化酶BCCP亚基的基因克隆与表达分析[J]. 水产学报, 2014, 38(6): 794-802
作者姓名:李燕  周志刚
作者单位:上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306;上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306
基金项目:国家自然科学基金(31172389);国家海洋局可再生能源专项(SHME2011SW02);上海高校海洋科学一流学科建设项目
摘    要:为了探讨在氮饥饿对缺刻缘绿藻花生四烯酸(ArA)合成与积累的影响,通过cDNA末端快速扩增(RACE)和设计简并引物进行反转录(RT)-PCR扩增,克隆了编码该藻异质型乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)的2个生物素羧基载体蛋白(BCCP)的基因序列。其中MiBCCP1基因的cDNA序列长1 267 bp,包含的5'-非翻译区(UTR)长44 bp,3'-UTR长524 bp,开放阅读框(ORF)长699 bp,编码232个氨基酸并含有45个氨基酸序列的叶绿体定位信号肽;预测成熟蛋白分子量约为20 ku。MiBCCP2基因的ORF长789 bp,编码263个氨基酸并含有49个氨基酸的叶绿体定位信号肽,推测成熟蛋白分子量约为22 ku,但其羧基端缺乏生物素酰基化位点。邻接法(NJ)构建的聚类图显示它们分属于2个不同的分支(靴带值为100)。采用半定量反转录(RT)-PCR技术分析这2个基因的表达量,结果显示,在氮饥饿光照培养条件下,它们的相对转录量都先短暂升高然后持续下调,从而表明缺刻缘绿藻脂肪酸的从头合成能力有下降的趋势。结合该藻的ArA含量在该培养条件下明显增加的结果,推测胞质中同质型ACCase对缺刻缘绿藻ArA合成与积累起着更重要的作用。

关 键 词:缺刻缘绿藻  乙酰辅酶A羧化酶  生物素羧基载体蛋白(BCCP)  氮饥饿  半定量反转录PCR
收稿时间:2014-02-05
修稿时间:2014-04-08

Cloning and transcription analysis of genes coding for BCCP subunit of acetyl-CoA carboxylase in Myrmecia incisa
LI Yan and ZHOU Zhigang. Cloning and transcription analysis of genes coding for BCCP subunit of acetyl-CoA carboxylase in Myrmecia incisa[J]. Journal of Fisheries of China, 2014, 38(6): 794-802
Authors:LI Yan and ZHOU Zhigang
Affiliation:College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China
Abstract:
Keywords:Myrmecia incisa  acetyl-CoA carboxylase  biotincarboxyl carrier protein subunit  nitrogen starvation  semi-quantitative RT-PCR
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