乙型脑炎病毒可视化快速检测方法的建立 |
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作者姓名: | 邢国珍 姬凯 薛继初 徐朝 郑文明 许君 |
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作者单位: | 河南农业大学生命科学学院,河南 郑州,450002 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;河南省高等学校重点科研项目;河南省科技攻关计划重点项目;河南省科技攻关计划重点项目;河南省科技攻关计划重点项目 |
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摘 要: | 利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了简便、可靠的快速检测乙型脑炎病毒JEV(Japanese encephalitis virus)的可视化方法。根据Gen Bank数据库中JEV Henan-09-03毒株(Gen Bank ID:GQ336809.1) E蛋白序列,设计了3对特异性LAMP引物,建立Bst DNA Polymerase等温扩增体系,优化后的反应体系可高灵敏性、特异性检测JEV。本方法通过在扩增产物中加入SYBR Green I染料后用石蜡进行封闭,在可见光下根据反应液荧光的颜色深浅来判断JEV扩增阳性强弱。结果显示,该方法的灵敏度可达5copies·m L-1,且与其他病毒,如乙型肝炎病毒HBV(Hepatitis B virus,HBV)无交叉反应。
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关 键 词: | 乙型脑炎病毒 E蛋白 环介导等温扩增技术(LAMP) RT-LAMP 特异性 灵敏度 |
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