母牛循环血抗精子抗体的固相酶染色法检测与不孕症关系的研究

利用固相酶染色法(Solid-phase Enzy em Staining Assay,SESA),检测奶母牛循的环血抗精子抗体(ASAb)本平,研究奶牛不孕机制,AsAb的检测意义及与不孕症之间关系。采集奶牛血清样共160例。包括:处女牛12例,妊娠及产后一月正常空怀母牛26例,屡配不孕母牛93例,子宫内膜炎母牛21例,隐性发情母牛8例。利用公牛正常新鲜精液,PBS洗3次,校正精子密度为50×10~6/ml,涂片,自行干燥,甲醇固定10—20分钟,加灭活血清样,37℃,30分钟,用PBS洗3次,加兔抗牛IgG-HRP,37℃,30分钟,PBS洗3次后,加新鲜配制底物DAB(3,3一二氨基联苯胺盐酸盐),继续作用30分钟(37℃),同法洗3次,油镜观察反应。结果:阳性(精子头部成棕黄色)俭出率,处女牛0％(0/12);正常孕牛7.7％(2/26);不孕母牛(平均)35.25％(43/122);子宫内膜炎不孕母牛28.57％-(6/21);屡配不孕母牛36.56％(34/93);隐性发情母牛37.50％(3/8)。不孕牛ASAb滴度最低为1:16,最高为1:256。结果表明,处女牛、正常孕牛与不孕牛的AsA b阳性检出率差异显著(P<0.01),屡配不孕母牛,子宫内膜炎不孕母牛及隐性发情母牛AsAb阳性检出率之间的差异不显著(P>0.05)。对屡配不孕牛不孕胎次及不孕期配种次数(1—12次)间的AsAb阳性率比较表明,不同配种次数(情期数)(3～6次)之间无统计学差异(P>0.05),不孕胎次之间亦无统计学差异(P>0.05)。研究表明,用SESA法检测母牛AsAb,阳性率与不孕症之间的相关性高,检测方法具有特异性强,敏感性、精密度较好的特点,对探索奶牛不孕机制,为奶牛不孕症的诊断与治疗提供实验手段和实验依据,具有理论与应用意义。