| 甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备 |
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| 引用本文： | 王凌琪,董婷婷,陈 雯,甘海锋,徐小伟,秦 朗,李良俊,贺 振.甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备[J].植物保护,2022,48(6):319-325. |
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| 作者姓名： | 王凌琪 董婷婷 陈 雯 甘海锋 徐小伟 秦 朗 李良俊 贺 振 |
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| 作者单位： | (扬州大学园艺与植物保护学院, 扬州 225009) |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金（BK20211323）；中央本级重大增减支项目（2060302）；国家特色蔬菜产业技术体系（CARS-24-B-03） |
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| 摘 要： | 根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1 375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-ProSPLV-lotus。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1∶256 000时,ELISA显色后OD450读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带。这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测。
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| 关 键 词： | 甘薯潜隐病毒莲藕分离物 辅助成分-蛋白酶 原核表达 抗血清 |
| 收稿时间： | 2021/9/18 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/12/21 0:00:00 |
Prokaryotic expression of sweet potato latent virus-lotus helper-component proteinase and antiserum preparation |
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| WANG Lingqi,DONG Tingting,CHEN Wen,GAN Haifeng,XU Xiaowei,QIN Lang,LI Liangjun,HE Zhen.Prokaryotic expression of sweet potato latent virus-lotus helper-component proteinase and antiserum preparation[J].Plant Protection,2022,48(6):319-325. |
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| Authors: | WANG Lingqi DONG Tingting CHEN Wen GAN Haifeng XU Xiaowei QIN Lang LI Liangjun HE Zhen |
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| Institution: | (School of Horticulture and Plant Protection, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sweet potato latent virus-lotus helpercomponent-proteinase prokaryotic expression antiserum |
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