| 向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 邝瑞瑞,#,雷 荣#,江 丽,段维军,李雪莲,符 娜,范在丰,李 远,吴品珊.向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立[J].植物保护,2022,48(6):69-76. |
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| 作者姓名： | 邝瑞瑞 # 雷 荣# 江 丽 段维军 李雪莲 符 娜 范在丰 李 远 吴品珊 |
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| 作者单位： | (1. 中国检验检疫科学研究院, 北京 100176; 2. 中国农业大学植物保护学院, 北京 100093; 3. 重庆医科大学永川附属医院, 重庆 402177; 4. 宁波检验检疫科学技术研究院, 宁波 315012; 5. 伊犁师范大学, 伊犁 835000) |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（2021YFC2600400,2021YFC2600402）;中国检验检疫科学研究院基本科研业务费(2020JK048) |
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| 摘 要： | 向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物。为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法。通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌。荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg。由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测。
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| 关 键 词： | 向日葵黑茎病菌 RPA CRISPR-Cas12a 荧光检测 侧向流层析试纸条 |
| 收稿时间： | 2022/7/6 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/9/19 0:00:00 |
Establishment of RPA/CRISPR-Cas12a rapid detection for Leptosphaeria lindquistii |
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| KUANG Ruirui,#,LEI Rong#,JIANG Li,DUAN Weijun,LI Xuelian,FU N,FAN Zaifeng,LI Yuan,WU Pinshan.Establishment of RPA/CRISPR-Cas12a rapid detection for Leptosphaeria lindquistii[J].Plant Protection,2022,48(6):69-76. |
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| Authors: | KUANG Ruirui # LEI Rong# JIANG Li DUAN Weijun LI Xuelian FU N FAN Zaifeng LI Yuan WU Pinshan |
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| Institution: | (1. Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100176, China; 2. College of Plant Protection, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 3. Yongchuan Hospital Affiliated to Chongqing Medical University; Chongqing 402177, China; 4. Ningbo Academy of Inspection and Quarantine, Ningbo 315012, China; 5. Yili Normal University, Yili 835000, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptosphaeria lindquistii RPA CRISPR-Cas12a fluorescent detection lateral flow strip |
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