| 柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化 |
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| 引用本文： | 谢 帆,#,龚 顺,#,王泽琼,肖玉雄,杜志强,仝 铸,何秀娟,邱文明,孙中海,潘志勇,肖 翠.柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化[J].植物保护,2024,50(3):234-246. |
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| 作者姓名： | 谢 帆 # 龚 顺 # 王泽琼 肖玉雄 杜志强 仝 铸 何秀娟 邱文明 孙中海 潘志勇 肖 翠 |
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| 作者单位： | 1. 湖北省农业科学院果树茶叶研究所, 果树种质创新与利用湖北省重点实验室, 武汉 430064; 2. 华中农业大学园艺林学学院, 果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室, 武汉 430070; 3. 宜昌三峡百景宜农业科技发展有限公司, 宜昌 443600 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（2021YFD1400802）；湖北省农业科学院青年拔尖人才培养计划（Q2021015） |
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| 摘 要： | 柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害, 目前没有可用的有效药剂和抗病品种, 分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价, 针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因, 构建质粒标准品并筛选适用于绝对定量PCR的最佳质粒。结果表明, 使用Es Taq MasterMix对感染 Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas)的柑橘样品进行常规PCR检测时, 在评价的16对引物中, OI1/OI2c、Las606/LSS和HLBF468/R877灵敏度最高, 推荐同时使用检测黄龙病菌含量低的样品；各组巢式PCR检测引物有其适用扩增体系, 部分引物用Es Taq MasterMix扩增时出现非特异性扩增, F1/B1→F3/B3则适用Es Taq MasterMix体系, 且最高可稳定特异检出105倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品（2×10-3 ng/μL）, 是灵敏度最高的引物组, OI1/OI2c→S3/S4在Es Taq MasterMix和Ex Taq DNA聚合酶体系中均可稳定特异检出104倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品（2×10-2 ng/μL）, 是适用扩增体系最广的引物组；构建的5个绝对定量PCR质粒标准品中, pnrdB83扩增效率最接近100%, 且在2次重复试验中波动最小, 稳定性最强, 并且作为标准品对黄龙病待测样品进行绝对定量时, 各样品在2次重复试验中的拷贝数差值最小, 是本研究筛选的最佳质粒。本研究的结果将为柑橘黄龙病菌的定性和定量分子检测提供参考。
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| 关 键 词： | 柑橘黄龙病 常规PCR 巢式PCR 绝对定量PCR 引物评价 |
| 收稿时间： | 2023/7/31 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/10/11 0:00:00 |
Molecular detection primer evaluation and absolute quantitative PCR system optimization of Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) |
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| XIE Fan,#,GONG Shun,#,WANG Zeqiong,XIAO Yuxiong,DU Zhiqiang,TONG Zhu,HE Xiujuan,QIU Wenming,SUN Zhonghai,PAN Zhiyong,XIAO Cui.Molecular detection primer evaluation and absolute quantitative PCR system optimization of Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas)[J].Plant Protection,2024,50(3):234-246. |
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| Authors: | XIE Fan # GONG Shun # WANG Zeqiong XIAO Yuxiong DU Zhiqiang TONG Zhu HE Xiujuan QIU Wenming SUN Zhonghai PAN Zhiyong XIAO Cui |
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| Institution: | 1. Hubei Key Laboratory for Germplasm Innovation and Utilization of Fruit Trees, Institute of Fruit and Tea, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064, China; 2. National Key Laboratory for Germplasm Innovation and Utilization of Horticultural Crops, College of Horticulture and Forestry Sciences, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China; 3. Yichang Three Gorges Baijingyi Agricultural Science and Technology Development Co., LTD., Yichang 443600, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Citrus Huanglongbing conventional PCR nested PCR absolute quantitative PCR primer evaluation |
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